Hoe om `n Gramvlek te maak

Gramvlek is `n vinnige prosedure wat gebruik word om die teenwoordigheid van bakterieë in weefselmonsters te soek en hulle as Gram-positief of Gram-negatief te identifiseer, gebaseer op die chemiese en fisiese eienskappe van hul selwande. Gramvlek moet byna altyd uitgevoer word as die eerste stap in die diagnose van a bakteriële infeksie

Die Gramvlek is vernoem na die Deense wetenskaplike Hans Christian Gram (1853 - 1938), wat in 1882 die tegniek ontwikkel het en in 1884 as `n tegniek gepubliseer het om te onderskei tussen twee tipes bakterieë met soortgelyke kliniese simptome: bakterieë Streptokokkus pneumoniae (ook bekend as pneumokokke) en Klebsiella pneumoniae.

stappe

2

Steriliseer `n glasskyfie vir `n mikroskoop. As die skyfie vuil is, was dit met seepwater om vet en vuil te verwyder. Disinfekteer dit met etanol, glas skoonmaker of die metode wat deur u laboratorium aanbeveel word.

3

Plaas die monster op die skyfie. U kan die Gram-vlekmetode gebruik om te help om bakterieë teenwoordig in mediese monsters of in bakteriese kulture in `n Petri-bakkie te identifiseer. Om Gramkleuring nuttig te maak, plaas `n laag dun van die monster op die skyfie. Ons beveel `n monster met minder as 24 uur sedert die oudste bakterieë selwande wat minder voorspelbaar Gramkleuring vorm reageer dalk beskadig.

4

Maak die monster met hitte vas. Die hitte sal die bakterieë aan die skyf regmaak sodat hulle nie so maklik spoel wanneer dit gekleur word nie. Skuif die skyfie twee of drie keer vinnig deur die vlam van `n Bunsen-brander of verhit dit op `n elektriese skuiwer. Moenie oorverhit of die monsters vervorm word nie. As jy `n Bunsen-brander gaan gebruik, moet die vlam `n klein, blou kegel wees, nie `n lang, oranje een nie.

5

Plaas die skyfie in `n kleurbak. `N Skinkbord vir kleuring is `n vlak bakplaat van metaal, glas of plastiek met `n klein gaas of draadhouer langs die bokant. Plaas die skyfies op hierdie stalletjie sodat die vloeistowwe wat u gaan gebruik, op die skinkbord gedreineer kan word.

2

Spoel die violetglas saggies uit. Kantel die skyfie en gebruik `n wasbottel om `n klein stroom gedistilleerde water of kraan oor die bokant van die skyfie te spuit. Die water moet op die oppervlak van die vlek drup, maar nie direk daarop gemik wees nie. Moenie oormatig spoel nie, wat verwyder kan word bakterieë Gram positief.

3

Week die vlek met jodium en spoel dan. Gebruik `n pipet om die vlek met jodium te bedek. Laat dit vir minstens 60 sekondes sit en spoel dit deeglik met dieselfde metode. Jodium, in die vorm van negatief gelaaide ione, interaksie met CV + ione om groot violet kristal en jodiumverbindings (CV-I verbindings) binne die binneste en buitenste lae van die sel te vorm. Dit val die kleur van die violet kristal in die sel, in die plek waar dit gekleur is.

4

Voeg `n bleikmiddel by en spoel dan vinnig. Vir hierdie kritieke stap word gewoonlik `n mengsel van asetoon en etanol in `n verhouding van 1: 1 gebruik. Die voltooiing van hierdie stap moet noukeurig bereken word. Hou die skyfie teen `n hoek en voeg dan die afbreekmiddel by totdat geen van die violette kleur sigbaar is in die afloop nie. Dit neem gewoonlik minder as 10 sekondes of selfs minder as die bleikmiddel `n hoë konsentrasie asetoon bevat. Stop dadelik of die afblaasmiddel verwyder die violet kristalkleuring van beide Gram-positiewe en Gram-negatiewe selle en die kleuring sal herhaal moet word. Spoel die oortollige dekoloriseringsmiddel onmiddellik met behulp van die bogenoemde tegniek.

5

Week die vlek met `n sekondêre vlek en spoel dan. `N Sekondêre kleurstof, gewoonlik safranien of fuchsien, word gebruik om bykomende kontras tussen Gram-positiewe en Gram-negatiewe bakterieë te voeg, verkleurde verkleurde (Gram-negatiewe) bakterieë van pienk of rooi. Laat die kleurstof in die monster vir minstens 45 sekondes, en spoel dit dan af.

6

Droog die skyfie. Jy kan die skyfie droog laat met lug of droog dit met behulp van absorberende papier wat vir hierdie doel verkoop word. Die Gramvlek is klaar.

2

Identifiseer Gram-positiewe en Gram-negatiewe bakterieë. Ondersoek die skyfie onder die ligmikroskoop. Gram-positiewe bakterieë sal violet lyk as gevolg van die violet kristal vasgevang in hul dik selwande. Die Gram-negatiewe bakterieë sal pienk of rooi lyk, aangesien die violet deur die dun selwande gespoel is en dan die pienk sekondêre kleurstof bygevoeg is.

3

Soek na verwysingsbeelde. As jy nie seker is wat `n bakterie is nie, kyk vir versamelings van verwysingsbeelde wat geklassifiseer word deur die vorm en gevolg van Gram-vlek. U kan databasisse aanlyn vind in die Nasionale Databasis van Mikrobiese Patogene van die VSA, Bakterieë in foto`s en baie ander webwerwe. Om die identifikasie verder te fasiliteer, word algemene of belangrike voorbeelde vir diagnose hieronder deur Gram se status en vorm geklassifiseer.

4

Identifiseer Gram-positiewe bakterieë volgens hul vorm. Bakterieë word verder geklassifiseer volgens hul vorm onder die mikroskoop, meestal as kokos (sferies) of stokke (silindries). Hierdie is `n paar algemene Gram positiewe bakterieë (gekleurde violet) geklassifiseer deur vorm:

5

Identifiseer Gram-negatiewe bakterieë Gram-negatiewe bakterieë (gekleurde pienk) word dikwels in drie groepe ingedeel. Kokke is sferiese bakterieë, die stange is lank en skraal bakterieë, en coccoid stokke is in `n intermediêre punt.

6

Evalueer die gemengde resultate. Sommige bakterieë is moeilik om presies te vlek weens die breekbaarheid van hul selwande of hoe wasagtig hulle is. Hulle kan `n mengsel van `n violet of pienk vlek in dieselfde sel of tussen verskillende selle in dieselfde monster hê. Enige monster van bakterieë wat ouer as 24 uur is, mag hierdie probleem hê, maar sommige spesies is moeilik om te vlek op enige ouderdom. Hulle kan meer gespesialiseerde toetse vereis dat die aantal moontlikhede te verminder vir identifikasie as die Ziehl-NEELSEN vlek, die waarneming van die groei van gewasse, die TSI agar of genetiese toetsing.

7

Gooi die materiaal weg. Die prosedures vir afvalverwydering wissel tussen laboratoriums en volgens die materiaal wat gebruik word. Normaalweg word die vloeistof in die vellebak as gevaarlike afval in verseëlde bottels weggegooi. Dip die skyfies in `n oplossing met 10% bleikmiddel en gooi dit dan in skerp houers.